Benotzung a Virsiichtsmoossname vun Ultrafiltratioun Zentrifuge Röhre
1) Wielt e passende Ultrafiltratiounsröhre.Bedenkt datt UF Membranen an hirem Toleranzniveau fir verschidde Chemikalien ënnerscheeden.Typesch kënnen Ultrafiltratiounsröhre mat engem 10 kDa Molekulargewiicht Ofschnëtt mat engem Molekulargewiichtofschnëtt ausgewielt ginn, deen net méi wéi 1 / 3 vum Molekulargewiicht vum Protein vum Interesse sollt sinn, sou wéi 35 kDa.Wann d'molekulare Gewiicht vum Protein vun Interesse ongeféier 10 kd ass, kann en Ultrafiltratiounsröhre mat engem Molekulargewiicht Ofschnëtt vun 3 KD benotzt ginn.
(2) D'Ultrafiltratioun, frësch kaaft, ass trocken, mat ultrapure Waasser virum Gebrauch a Waasser komplett duerch d'Membran, d'Äisbad oder de Kühlschrank virgekillt fir e puer Minutten.Dann gëtt d'Waasser ofgegoss, also d'Proteinflëssegkeet, a wéi vill gëtt derbäigesat, wat och ëmmer net méi ass wéi déi wäiss Linn uewen am Röhre.D'Operatioun ass liicht, an d'Ultrafiltratiounsröhre muss op Äis virgekillt ginn ier d'Proteinléisung bäigefüügt gëtt.
3) Souwuel Mass wéi Schwéierpunkt sollten d'Gläichgewiicht erreechen.Notéiert d'Rotatiounsgeschwindegkeet an d'Beschleunigung sinn net ganz séier, soss beschiedegt d'Ultrafiltratiounsmembran direkt.Zentrifugal Ultrafiltratioun gouf ugefaang (Zentrifuge virgekillt op 4 Grad).Nodeems d'RPM vu verschiddene Zentrifugen op g ëmgewandelt gouf, war et anescht.D'Beschleunigung vun der Zentrifuge gouf op e Minimum ugepasst, wat den Drock op der Membran reduzéiert.Notiz, gitt sécher d'Zentrifuge ze verloossen nodeems d'Zentrifuge seng Destinatiounsgeschwindegkeet erreecht huet, oder wann Dir e Problem hutt, kënnt Dir et net fir d'éischte Kéier handhaben.D'Orientéierung vun der Membran op d'Spindel gouf no den Instruktiounen ugepasst (wénkel Zentrifugefall ass Membran op d'Achs senkrecht).Am praktesche Gebrauch ass d'allgemeng Rotatiounsgeschwindegkeet manner wéi déi an den Instruktiounen, sou datt d'Liewen vum Zentrifugeröhre verlängert ka ginn.
3) Souwuel Mass wéi Schwéierpunkt sollten d'Gläichgewiicht erreechen.Notéiert d'Rotatiounsgeschwindegkeet an d'Beschleunigung sinn net ganz séier, soss beschiedegt d'Ultrafiltratiounsmembran direkt.Zentrifugal Ultrafiltratioun gouf ugefaang (Zentrifuge virgekillt op 4 Grad).Nodeems d'RPM vu verschiddene Zentrifugen op g ëmgewandelt gouf, war et anescht.D'Beschleunigung vun der Zentrifuge gouf op e Minimum ugepasst, wat den Drock op der Membran reduzéiert.Notiz, gitt sécher d'Zentrifuge ze verloossen nodeems d'Zentrifuge seng Destinatiounsgeschwindegkeet erreecht huet, oder wann Dir e Problem hutt, kënnt Dir et net fir d'éischte Kéier handhaben.D'Orientéierung vun der Membran op d'Spindel gouf no den Instruktiounen ugepasst (wénkel Zentrifugefall ass Membran op d'Achs senkrecht).Am praktesche Gebrauch ass d'allgemeng Rotatiounsgeschwindegkeet manner wéi déi an den Instruktiounen, sou datt d'Liewen vum Zentrifugeröhre verlängert ka ginn.
(4) Wann Dir op déi verbleiwen 1ml konzentréiert ass, huelt 50ul Pufferléisung, füügt 10ul Flux duerch a kuckt ob et eng blo Faarf ass, als Uerteel ob den Ultrafiltratiounsröhre Protein fehlt.Wann d'Tube leck ass, gitt déi iewescht Schicht erëm a fléisst duerch an en neit Rouer fir d'Ultrafiltratioun unzefänken.Fir genau ze bestëmmen ob d'Tubes verpasst goufen, centrifugéiert 10min mat 5mgml BSA virum Duerchfluss, laaft op Proteinklebstoff oder Bradford Crude Assay, a fuert weider andeems déi verbleiwen konzentréiert Proteinléisung bäigefüügt (déi op Äis funktionnéiert a verhënnert datt d'Proteine hëtzt) bis all vun der konzentréieren ass dobäi.Passt op wärend der Zentrifugéierung wann Nidderschlag vu Proteinen optrieden, wat zu Röhreschließung féiert.Wann Nidderschlag geschitt, bestëmmen ob déi spezifesch Ursaach vum Nidderschlag eng exzessiv Proteinkonzentratioun oder en onpassend Puffer ass;Déi fréier kann duerch Ultrafiltratioun vu multiple Ultrafiltratiounsröhre gläichzäiteg geléist ginn, d'Konzentratioun erofsetzen, an déi lescht duerch d'Austausch vu verschiddene Pufferléisungen bis keng Nidderschlag vum Protein geschitt.
(4) Wann Dir op déi verbleiwen 1ml konzentréiert ass, huelt 50ul Pufferléisung, füügt 10ul Flux duerch a kuckt ob et eng blo Faarf ass, als Uerteel ob den Ultrafiltratiounsröhre Protein fehlt.Wann d'Tube leck ass, gitt déi iewescht Schicht erëm a fléisst duerch an en neit Rouer fir d'Ultrafiltratioun unzefänken.Fir genau ze bestëmmen ob d'Tube verpasst goufen, centrifugéiert 10min mat 5mgml BSA virum Duerchfluss, laaft op Proteinkleim oder Bradford Crude Assay, a fuert weider andeems Dir déi verbleiwen konzentréiert Proteinléisung bäidréit (déi op Äis funktionnéiert a verhënnert datt d'Proteine hëtzt) bis all vun der konzentréieren ass dobäi.Passt op wärend der Zentrifugéierung wann Nidderschlag vu Proteinen optrieden, wat zu Röhreschließung féiert.Wann Nidderschlag geschitt, bestëmmen ob déi spezifesch Ursaach vum Nidderschlag eng exzessiv Proteinkonzentratioun oder en onpassend Puffer ass;Déi fréier kann duerch Ultrafiltratioun vu multiple Ultrafiltratiounsröhre gläichzäiteg geléist ginn, d'Konzentratioun erofgoen, an déi lescht duerch d'Austausch vu verschiddene Pufferléisungen bis keng Nidderschlag vum Protein geschitt.
(5) Déi éischt puer Schrëtt gi benotzt fir de Protein ze konzentréieren, a wann de Puffer geännert soll ginn, füügt sanft neie Puffer (Ultrafiltratioun duerch eng 0.22um Ultrafiltratiounsmembran) op ongeféier 1ml vum Gesamtprotein, a konzentréiert op ongeféier 1ml fir dräi hannereneen mol, mat der Finale konzentréiert Finale Volume ofhängeg vun der gewënschter Protein Konzentratioun, allgemeng net méi wéi 500ul, awer och bannent 200ul.Erreechen 1000 × oder méi op dräi Geleeënheeten, wesentlech sou vill Puffer änneren, wéi berechent duerch op d'mannst 10 × oder esou Volumen Beräicherung all Kéier.
(5) Déi éischt puer Schrëtt gi benotzt fir de Protein ze konzentréieren, a wann de Puffer geännert soll ginn, füügt sanft neie Puffer (Ultrafiltratioun duerch eng 0.22um Ultrafiltratiounsmembran) op ongeféier 1ml vum Gesamtprotein, a konzentréiert op ongeféier 1ml fir dräi hannereneen mol, mat der Finale konzentréiert Finale Volume ofhängeg vun der gewënschter Protein Konzentratioun, allgemeng net méi wéi 500ul, awer och bannent 200ul.Erreechen 1000 × oder méi op dräi Geleeënheeten, wesentlech sou vill Puffer änneren, wéi berechent duerch op d'mannst 10 × oder esou Volumen Beräicherung all Kéier.
Post Zäit: Nov-09-2022